圖片來(lái)源于瑞典皇家科學(xué)院

   2018 年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了弗朗西斯·阿諾德（Frances Arnold），喬治·史密斯（George Smith）和格雷格·保羅·溫特（Gregory Paul Winter），表彰他們?cè)诿傅亩ㄏ蜻M(jìn)化，以及多肽與抗體的噬菌體展示技術(shù)領(lǐng)域的貢獻(xiàn)。

   雖然化學(xué)獎(jiǎng)授予了3個(gè)在生物學(xué)領(lǐng)域有突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家這事兒挺稀奇的，但是這種跨界卻也無(wú)可厚非，表面上看上去毫無(wú)關(guān)聯(lián)，但內(nèi)核卻息息相通，這些創(chuàng)新技術(shù)的背后都是亙古不變的生物生存法則——進(jìn)化，而進(jìn)化的本質(zhì)在化學(xué)層面上就是基因變異，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)在分子層面上發(fā)生改變，產(chǎn)生新的物種，造就豐富多彩的世界。成功者上位曰為“進(jìn)化”，失敗者則出局淹沒(méi)在浩瀚的歷史長(zhǎng)河中，這就是自然法則。三位科學(xué)家的偉大之處就是巧妙的利用了自然法則，不僅向自然學(xué)習(xí)，更超越了自然，應(yīng)用這個(gè)法則來(lái)造福蕓蕓眾生。其中，F(xiàn)rances發(fā)明的“定向進(jìn)化”（Directed Evolution）技術(shù)通過(guò)對(duì)野生酶進(jìn)行基因工程改造，實(shí)現(xiàn)了酶的定向進(jìn)化，可高效獲得符合不同應(yīng)用場(chǎng)景所需的酶；而George和Gregory的主要貢獻(xiàn)是開(kāi)發(fā)了一種叫做“噬菌體展示”（Phage Display）的技術(shù)，利用噬菌體來(lái)表達(dá)感興趣的基因，進(jìn)而對(duì)這些蛋白質(zhì)進(jìn)行高效篩選和進(jìn)化，用于更好的開(kāi)發(fā)抗體藥物。

   你可能會(huì)覺(jué)得這些技術(shù)聽(tīng)上去都挺高大上的，但和我們的生活有什么關(guān)聯(lián)呢？遠(yuǎn)的不說(shuō)，今天就來(lái)詳細(xì)解析一下“定向進(jìn)化”技術(shù)及其在新一代測(cè)序技術(shù)（NGS）上的小應(yīng)用。

   眾所周知，當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)已經(jīng)跨入了“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”（Precision Medicine）時(shí)代，和“經(jīng)驗(yàn)醫(yī)學(xué)”（Empirical Medicine，第一代）及“循證醫(yī)學(xué)”（Evidence-based Medicine，第二代）所不同的是，精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)非常強(qiáng)調(diào)個(gè)體化的精準(zhǔn)診斷和治療，同病可異治（Umbrella Trial），異病也可同治（Basket Trial），前者追尋相似的疾病表征下是否有不同的基因驅(qū)動(dòng)機(jī)制以及因人而異的治療策略，使患者得到更適合的治療；后者則關(guān)注不同疾病背后是否有相同的基因驅(qū)動(dòng)機(jī)制以及有沒(méi)有現(xiàn)有的治療手段可以應(yīng)用，讓患者得到更及時(shí)的治療。但無(wú)論是同病異治還是異病同治，都離不開(kāi)NGS技術(shù)的崛起和進(jìn)步，毫不夸張的說(shuō)，沒(méi)有NGS技術(shù)就沒(méi)有精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)。

   同樣，NGS技術(shù)也離不開(kāi)幾個(gè)核心的基礎(chǔ)技術(shù)，高保真聚合酶就是其中的“關(guān)鍵先生”之一，而我們今天的主角——定向進(jìn)化——就是獲得高性能高保真聚合酶的技術(shù)保障，業(yè)內(nèi)目前普遍認(rèn)可的 KAPA HiFi 系列高保證聚合酶的誕生即得益于“定向進(jìn)化”的強(qiáng)大威力。

   “定向進(jìn)化”技術(shù)帶來(lái)的文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率的提升。此處采用“文庫(kù)轉(zhuǎn)化率”這個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)來(lái)評(píng)估建庫(kù)的整體效率，轉(zhuǎn)化率越高，建庫(kù)效率也越高。（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   那么，何為“定向進(jìn)化”技術(shù)呢？

   簡(jiǎn)而言之，就是開(kāi)了掛的人工進(jìn)化技術(shù)。無(wú)論是自然進(jìn)化還是定向進(jìn)化，都是特定基因的突變或重組，進(jìn)而產(chǎn)生多樣化的蛋白質(zhì)，通過(guò)自然篩選產(chǎn)生多樣化的生命。但自然進(jìn)化和定向進(jìn)化的區(qū)別就是，前者的過(guò)程是極其緩慢的、不可控的。地球經(jīng)歷了40多億年才孕育出如今的文明，相比之下，人類短暫的生命只是滄海一粟，又能經(jīng)歷多少等待呢？Frances Arnold給出的答案就是后者——定向進(jìn)化——只爭(zhēng)朝夕！KAPA也正是通過(guò)這種在實(shí)驗(yàn)室模擬和加速野生酶的自然進(jìn)化過(guò)程，成功地將自然進(jìn)化的效率提升了幾百萬(wàn)倍，獲得了一系列性能優(yōu)異的工程酶，包括高保真聚合酶，多重PCR聚合酶，耐受PCR抑制的聚合酶，片段化酶，連接酶，反轉(zhuǎn)錄聚合酶等等。

KAPA 酶的定向進(jìn)化歷程

   這些酶的“定向進(jìn)化”往往會(huì)經(jīng)歷以下幾個(gè)步驟：

   · 對(duì)野生酶的編碼基因序列進(jìn)行隨機(jī)變異，產(chǎn)生一個(gè)變異序列庫(kù)，約包含上億個(gè)變種序列。

   · 變種序列被轉(zhuǎn)染到大腸桿菌的基因組中，每個(gè)單克隆都被包裹在一個(gè)微小的液滴中進(jìn)行孵育和表達(dá)。由于大腸桿菌具有培養(yǎng)簡(jiǎn)單、復(fù)制快、可高效表達(dá)植入的基因等特性，因而可高通量的獲得一系列按照不同變種序列翻譯而來(lái)的變種酶。

   · 施加各種生存壓力（如高溫、抑制劑、低容錯(cuò)等等）至反應(yīng)體系，選擇性地篩選出最適應(yīng)壓力環(huán)境的變種酶。

   · 循環(huán)往復(fù)地重復(fù)上述步驟，每次選出相對(duì)最好的酶進(jìn)行下一輪進(jìn)化，來(lái)不斷優(yōu)化和提升酶的特定性能，直至滿足相應(yīng)的應(yīng)用場(chǎng)景。

   這些方法聽(tīng)上去是不是都挺普通的？但是進(jìn)化的成果卻不容小覷。接下來(lái)我們就以 KAPA HiFi 高保真聚合酶和 KAPA SYBR FAST 聚合酶為例，展示一下“定向進(jìn)化”的威力吧。

   高保真酶，顧名思義，就是要求聚合酶在PCR擴(kuò)增中，既要保證擴(kuò)增的高準(zhǔn)確度，也能兼顧擴(kuò)增效率的基本特性。高準(zhǔn)確度往往就體現(xiàn)在較低的擴(kuò)增錯(cuò)誤率（即堿基錯(cuò)配比例）和較高的擴(kuò)增均一性（即擴(kuò)增偏好較小，不易受到基因組GC堿基含量的改變而帶來(lái)擴(kuò)增效率的改變）這兩方面。經(jīng)過(guò)定向進(jìn)化得來(lái)的 KAPA HiFi酶就擁有這樣的優(yōu)良特性，不僅擴(kuò)增產(chǎn)量高、片段長(zhǎng)，而且錯(cuò)誤率低和擴(kuò)增偏好小，非常適合NGS應(yīng)用。

KAPA HiFi 擴(kuò)增長(zhǎng) hgDNA 片段的表現(xiàn)

KAPA HiFi 酶（上）和 Phusion 酶（下）擴(kuò)增高GC含量模板的表現(xiàn)

KAPA HiFi 酶的堿基錯(cuò)配率及和其他高保真酶的比較

（以上數(shù)據(jù)均來(lái)源于羅氏診斷總部）

   KAPA SYBR Fast 聚合酶，也顧名知其意，是一種能夠耐受高 SYBR Green 染料的聚合酶。SYBR Green 染料是一種能和雙鏈DNA結(jié)合，在特定激發(fā)光下發(fā)射熒光的染料，常被用來(lái)作為PCR的指示劑。因其易得、成本低廉和適用范圍廣的特性，已被廣泛應(yīng)用在分子生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。但這種染料也有其缺點(diǎn)，那就是會(huì)對(duì)DNA聚合酶產(chǎn)生一定的抑制作用，造成擴(kuò)增效率的下降。經(jīng)過(guò)定向進(jìn)化得來(lái)的 KAPA SYBR Fast 聚合酶就擁有克服這種抑制的優(yōu)良特性，無(wú)論在低濃度或是高濃度的 SYBR Green 環(huán)境下，均有穩(wěn)定的擴(kuò)增效率表現(xiàn)，這種特性可幫助用戶采用更高濃度的SYBR Green染料，從而獲得更高的熒光信號(hào)，改善信噪比，降低檢出的靈敏度，增加定量的線性范圍。

野生聚合酶在高濃度SYBR Green環(huán)境下呈現(xiàn)擴(kuò)增抑制，以及染料濃度和熒光信號(hào)強(qiáng)度之間產(chǎn)生倒掛的問(wèn)題。

KAPA SYBR Fast 在高濃度SYBR Green環(huán)境下不僅耐受抑制，而且染料濃度和熒光信號(hào)強(qiáng)度呈正比。

   正是有了這些通過(guò)“定向進(jìn)化”得來(lái)的高性能酶，才使得 KAPA NGS樣品制備產(chǎn)品家族的成員從眾多同類產(chǎn)品中脫穎而出，成為行業(yè)普遍認(rèn)可的佼佼者，無(wú)論是 KAPA HiFi 還是 KAPA SYBR Fast 都已經(jīng)成為了 KAPA 文庫(kù)制備試劑盒以及文庫(kù)定量試劑盒的“靈魂”。

定向進(jìn)化技術(shù)是KAPA產(chǎn)品家族的“靈魂”

   高品質(zhì)NGS應(yīng)用酶，帶來(lái)的不僅僅是NGS應(yīng)用體驗(yàn)上的改善，更可幫助用戶從困難樣本中獲得高質(zhì)量的NGS數(shù)據(jù)，從而克服終端應(yīng)用的各種挑戰(zhàn)，這些困難樣本包括：

   · 起始量低，如細(xì)胞游離DNA（cfDNA），循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA），單細(xì)胞（Single Cell），穿刺樣品（Fine-needle Aspirate）和拭子樣品（Swab）等

   · 降解程度高，如福爾馬林固定-石蠟包埋樣品（FFPE）等

   · GC含量變化大，如微生物和植物樣品等

   · 異質(zhì)性高、成分復(fù)雜的樣品中檢測(cè)低頻變異或低豐度轉(zhuǎn)錄本，如腫瘤樣品等

   這些挑戰(zhàn)背后往往伴隨的是以下樣品制備上的困難：

   · 可測(cè)序分子含量少，往往不夠測(cè)序儀的上機(jī)要求。

   · 攜帶關(guān)鍵信息的分子含量更少，易被無(wú)效的序列或重復(fù)的序列信息所淹沒(méi)，或因各種制備上的局限性而丟失。

   · 同一樣品中的不同部分難以獲得相似的文庫(kù)轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增效率，建庫(kù)前后的差異性較大，難以還原原始樣品。

   · 不同樣品的文庫(kù)混合上機(jī)測(cè)序時(shí)難以獲得“等摩爾混合”的效果，不僅達(dá)不到測(cè)序芯片的最佳成簇密度，造成通量浪費(fèi)，而且也容易造成不同樣品的數(shù)據(jù)產(chǎn)出量不均，影響后續(xù)生物信息學(xué)分析。

   KAPA采用定向進(jìn)化技術(shù)，可從根本上去克服這些樣品制備上的困難：

   · 高文庫(kù)轉(zhuǎn)化和擴(kuò)增效率，意味著低起始量樣品、降解樣品、或者攜帶關(guān)鍵信息的序列只需較少的PCR循環(huán)數(shù)即可達(dá)到上機(jī)要求的文庫(kù)產(chǎn)量，不僅有效保留了關(guān)鍵信息，而且不會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的重復(fù)序列，既節(jié)省了測(cè)序通量，又放大了關(guān)鍵信息。

   · 高保真度和低擴(kuò)增偏好，意味著更廣的目標(biāo)區(qū)域覆蓋度和更均一的測(cè)序深度，不易遺漏關(guān)鍵點(diǎn)，也更能還原樣品本身，降低后端生信分析的難度。

   · 高 SYBR Green 耐受度，意味著可提高熒光染料濃度來(lái)獲得更靈敏、更穩(wěn)定的PCR檢測(cè)信號(hào)，增加定量和質(zhì)量評(píng)估的準(zhǔn)確性。

   · 隨機(jī)的酶切片段化，意味著近似物理打斷的片段化效果，可滿足大通量、自動(dòng)化應(yīng)用的需求。

   接下來(lái)就用兩個(gè)困難樣品的應(yīng)用實(shí)例來(lái)佐證KAPA的實(shí)力吧。

   KAPA RNA Hyper+RiboErase Kit 在 FFPE-RNA樣品制備中的應(yīng)用

   如今，腫瘤FFPE-RNA測(cè)序得到了越來(lái)越多的關(guān)注，因?yàn)槠渲袛y帶的基因融合變異信息，無(wú)論在診斷還是治療層面上都非常有價(jià)值。

   眾所周知，RNA相比DNA更易降解，所以RNA樣品的質(zhì)量直接關(guān)乎NGS測(cè)序數(shù)據(jù)的質(zhì)量。在RNA測(cè)序的各種應(yīng)用中，F(xiàn)FPE-RNA測(cè)序無(wú)疑是“Mission Impossible”的存在，不僅是因?yàn)楦叨冉到獾木壒?，完整的RNA分子含量非常有限，也是因?yàn)榭俁NA樣本中本身就有約90%都是無(wú)用的核糖體RNA（rRNA）序列，易干擾到有價(jià)值的變異信息的檢出。因此，F(xiàn)FPE-RNA樣品制備前，通常需要進(jìn)行樣品質(zhì)量的評(píng)估。常用的方法是用核酸分析儀對(duì)FFPE-RNA樣品進(jìn)行檢測(cè)，用DV200指標(biāo)來(lái)評(píng)估樣品質(zhì)量的好壞，DV200即長(zhǎng)度超過(guò)200bp的RNA序列在所有RNA序列中的占比，DV200的百分比越高，樣品的質(zhì)量就越好。

   我們分別測(cè)試了DV200在6%~95%之間的若干個(gè) FFPE-RNA 樣品，通過(guò) KAPA RNA Hyper+RiboErase Kit 建庫(kù)后的表現(xiàn)（這是一款可以對(duì)rRNA進(jìn)行消除的高性能RNA建庫(kù)產(chǎn)品）。

   在樣品評(píng)估階段，我們發(fā)現(xiàn)RNA質(zhì)量對(duì)最終的文庫(kù)產(chǎn)量影響很大，DV200越低，最終建庫(kù)后的文庫(kù)得率也越低，接頭連接效率也越低。

   RNA質(zhì)量對(duì)最終文庫(kù)得率的影響。A）3種不同質(zhì)量的FFPE樣品抽提后的RNA長(zhǎng)度分布。B）A中3種樣品各取25ng通過(guò)KAPA RNA Hyper Kit（無(wú)RiboErase富集模塊）進(jìn)行建庫(kù)后的得率和長(zhǎng)度分布，每個(gè)樣品各1個(gè)重復(fù)。不難看出，質(zhì)量越好的樣品，文庫(kù)得率越高，而DV200低于11%，已經(jīng)不值得再進(jìn)行NGS測(cè)序。（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   RNA質(zhì)量對(duì)最終接頭連接效率的影響。A）取不同質(zhì)量的FFPE-RNA樣本（DV200在6%-95%之間）各100ng，通過(guò)KAPA RNA Hyper+RiboErase Kit進(jìn)行建庫(kù)后接頭連接效率的評(píng)估，藍(lán)色為接頭聚合體含量，綠色為可測(cè)序文庫(kù)含量，可見(jiàn)質(zhì)量越低，越難獲得有效的測(cè)序文庫(kù)，大多情況下獲得的都是接頭聚合體的擴(kuò)增產(chǎn)物，如B）中所示，而僅僅采用熒光定量的方法來(lái)評(píng)估最終文庫(kù)的產(chǎn)量，是非常片面的，極易導(dǎo)致NGS測(cè)序失敗。（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   基于以上認(rèn)識(shí)，我們?cè)O(shè)計(jì)了如下的實(shí)驗(yàn)方案，摸索了針對(duì)不同樣品質(zhì)量的最優(yōu)建庫(kù)流程。（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   以下是 KAPA RNA Hyper+RiboErase Kit 針對(duì)不同質(zhì)量樣品的建庫(kù)表現(xiàn)。不難看出，無(wú)論樣品質(zhì)量和起始量的高低，KAPA試劑盒均表現(xiàn)出了較高的建庫(kù)效率。在文庫(kù)得率，上靶率，Unique轉(zhuǎn)錄本檢出數(shù)，PCR重復(fù)率、測(cè)序覆蓋均一性及重現(xiàn)性等關(guān)鍵指標(biāo)上，均表現(xiàn)出色。

   KAPA RNA Hyper+RiboErase Kit 針對(duì)不同質(zhì)量FFPE-RNA樣品的建庫(kù)表現(xiàn)。不同顏色代表了不同質(zhì)量高低的樣品，從左往右，樣品質(zhì)量依次降低。在不同樣品質(zhì)量和不同起始量的條件下，比較了A）Reads上靶率，B）重復(fù)Reads比例，C）覆蓋均一性，以及D）Unique Reads檢出數(shù)。KAPA均顯示出了高度的一致性和建庫(kù)效率。（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   KAPA RNA Hyper+RiboErase Kit 針對(duì)不同重復(fù)之間的相關(guān)性表現(xiàn)。無(wú)論在什么樣品質(zhì)量的條件下，KAPA在同一樣品的不同重復(fù)之間均顯示出了極高的相關(guān)性（如A、B、C所示）；在同一樣品的不同起始量重復(fù)之間也顯示出了極高的相關(guān)性（如D所示）；在同一類型樣品，不同RNA質(zhì)量重復(fù)之間（FFPE vs. 新鮮冰凍）也均顯示出了極高的相關(guān)性（如E、F所示）（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   KAPA Hyper Plus Kit 在微生物樣品制備中的應(yīng)用

   目前，有不少科研用戶或自動(dòng)化平臺(tái)用戶更傾向于酶法來(lái)代替物理打斷法進(jìn)行DNA片段化。因?yàn)榍罢卟粌H對(duì)硬件的要求低，流程體驗(yàn)更簡(jiǎn)化，而且同時(shí)提高了文庫(kù)轉(zhuǎn)化率，可謂一舉兩得。酶法片段化又可分為轉(zhuǎn)座酶片段化和混合酶切片段化兩種主流的方法學(xué)。基于轉(zhuǎn)座酶片段化技術(shù)的微生物NGS文庫(kù)構(gòu)建，常有三個(gè)惱人的局限性：

   · 片段長(zhǎng)度控制不佳，對(duì) DNA 起始量敏感

   · 文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率較低

   · 序列起始位點(diǎn)偏差大（與片段化技術(shù)相關(guān)），高挑戰(zhàn)區(qū)的擴(kuò)增偏好明顯（高GC或AT含量區(qū)）

   這些局限性限制了樣品的起始量和類型，降低了起始DNA轉(zhuǎn)換為可測(cè)序文庫(kù)的效率，以及文庫(kù)Reads的多樣性，從而影響覆蓋深度和均一性，最終影響測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量和 de novo 測(cè)序的基因組完整性。

   使用KAPA Hyper Plus 文庫(kù)制備試劑盒則可有效克服上述困難，相比同類產(chǎn)品，可獲得更高的文庫(kù)產(chǎn)量，片段長(zhǎng)度適中，片段化起始位點(diǎn)偏差小，困難區(qū)域擴(kuò)增偏好性小，覆蓋深度及均一性表現(xiàn)良好等特性，在3種GC含量不同的細(xì)菌樣品間的一致性好，性能更穩(wěn)定。

   我們?cè)O(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)方案，均按照標(biāo)準(zhǔn)流程操作。結(jié)果如下。（數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部）

   首先是文庫(kù)產(chǎn)量和片段長(zhǎng)度分布，不難看出KAPA試劑盒在經(jīng)歷同類產(chǎn)品相當(dāng)?shù)腜CR循環(huán)數(shù)之后，可測(cè)序文庫(kù)產(chǎn)量要高出同類產(chǎn)品數(shù)倍，且片段長(zhǎng)度適中，GC含量對(duì)產(chǎn)量的影響相對(duì)最小，體現(xiàn)了較高的建庫(kù)效率。

   KAPA 文庫(kù)制備產(chǎn)品和同類產(chǎn)品對(duì)GC含量不同的3種微生物基因組樣品的文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率的比較。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部)

   KAPA 文庫(kù)制備產(chǎn)品和同類產(chǎn)品對(duì)GC含量不同的3種微生物基因組樣品的文庫(kù)片段長(zhǎng)度的分布比較。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏總部)

   其次，在酶法片段化的偏好性上，KAPA Hyper Plus 的片段化的隨機(jī)性最接近物理打斷的效果，偏好性為同類產(chǎn)品最低。

   KAPA 文庫(kù)制備產(chǎn)品和同類產(chǎn)品對(duì)GC含量不同的3種微生物基因組樣品的片段化起始位點(diǎn)偏差比較，機(jī)械片段化+HyperPrep 偏差最小，HyperPlus 比其他轉(zhuǎn)座酶片段化產(chǎn)品的偏差都要小，且在GC含量不同的樣品中顯示出高度一致性。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部)

   第三，在測(cè)序均一性等指標(biāo)上，KAPA 試劑盒均表現(xiàn)出良好的測(cè)序深度和覆蓋均一性，受GC含量的影響最小。

   KAPA 文庫(kù)制備產(chǎn)品和同類產(chǎn)品對(duì)GC含量不同的3種微生物基因組樣品的覆蓋深度比較， HyperPrep 和 HyperPlus 比其他產(chǎn)品的覆蓋深度都要高，且在GC含量不同的樣品中顯示出高度一致性。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部)

   KAPA 文庫(kù)制備產(chǎn)品和同類產(chǎn)品對(duì)GC含量不同的3種微生物基因組樣品的GC偏好性比較， HyperPrep 和 HyperPlus 比其他產(chǎn)品在GC含量不同的樣品中均顯示出較好的無(wú)偏性，其他產(chǎn)品為了達(dá)到較好的AC-，GC-區(qū)域覆蓋均一性，需要消耗較多的測(cè)序通量，因而時(shí)間和成本都顯著增加。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部)

   不同的文庫(kù)構(gòu)建方法對(duì)基因組特定區(qū)域更局部的影響。采用 HyperPrep 和 HyperPlus，每種微生物的每個(gè)區(qū)域都實(shí)現(xiàn)了類似且高度均一的覆蓋度。而其他產(chǎn)品的比對(duì)讀數(shù)分布不均勻，尤其是AT-富集的C. difficile毒力基因。另外，其他產(chǎn)品在GC-富集的B. pertussis毒力基因編碼區(qū)域中有兩個(gè)明顯缺口，無(wú)讀數(shù)可用。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏總部)

   最后，在de novo測(cè)序上，KAPA試劑盒也體現(xiàn)出了一定的優(yōu)越性，具體表現(xiàn)在contig的數(shù)量最低，contig的最長(zhǎng)長(zhǎng)度和N50長(zhǎng)度都高于同類產(chǎn)品，這使得后期拼接組裝更容易。

   對(duì)4種文庫(kù)構(gòu)建方法的關(guān)鍵 de novo 組裝指標(biāo)進(jìn)行比較，包括 contig 的數(shù)量，最長(zhǎng) contig 的長(zhǎng)度和 N50 長(zhǎng)度。HyperPrep 和 HyperPlus 在所有指標(biāo)上均優(yōu)于其他產(chǎn)品。(數(shù)據(jù)來(lái)源于羅氏診斷總部)

   從以上實(shí)例中，你是不是已經(jīng)感受到了“定向進(jìn)化”的威力了呢？

   心動(dòng)不如行動(dòng)，點(diǎn)擊下方的閱讀原文鏈接，去KAPA官網(wǎng)了解更多的應(yīng)用信息，或長(zhǎng)按以下圖片，識(shí)別二維碼，參與到KAPA試用體驗(yàn)的活動(dòng)中來(lái)吧！

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http://lifescience.roche-diagnostics.cn/index.aspx

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